Adaptation of a real-time PCR method for the detection and quantification of pathogenic leptospires in environmental water.

Leptospirosis is a major zoonotic disease that affects humans and animals in all continents, in both rural and urban areas. In Europe, metropolitan France is the most affected country, with about 300 human cases declared per year. In France, although leptospirosis is now mostly considered as a recreational disease related to freshwater areas, isolation of pathogenic leptospires from environmental water samples still remains difficult. It thus seemed important to set up an efficient method to detect and quantify these bacteria in this environment. We determined a DNA extraction method suitable for freshwater samples and adapted a real-time quantitative PCR based on the detection of the LipL32 gene using the SYBR green chemistry. The method developed is specific for pathogenic Leptospira. It permits the detection of all the pathogenic strains tested and none of the saprophytic strains. Quantification is possible between 10 and 10⁷ bacteria/mL, and therefore, the method represents a tool that could be integrated into future public health surveillance programs for recreational freshwater areas. [ABSTRACT FROM AUTHOR]

La leptospirose est une zoonose qui affecte les humains et les animaux des quatre continents, tant en région rurale qu'en région urbaine. En Europe, la France métropolitaine est la région la plus affectée avec environ 300 cas humains déclarés par année. En France, même si la leptospirose est maintenant surtout considérée comme une maladie associée aux loisirs nautiques en eau douce, l'isolement de leptospires pathogènes d'échantillons d'eau de l'environnement demeure encore difficile. Il a donc semblé important de mettre au point une méthode efficace de détection et de quantifier cette bactérie dans l'environnement. Nous avons développé une méthode d'extraction d'ADN applicable aux échantillons d'eau douce et nous avons adapté un protocole de PCR en temps réel basé sur la détection du gène LipL32 en utilisant la chimie du SYBR green. La méthode développée est spécifique à Leptospira pathogène. Elle permet de détecter toutes les souches pathogènes testées et aucune des souches saprophytes. La quantification est possible entre 10 à 10⁷ bactéries/mL et constitue donc un outil qui pourrait être intégré à des programmes de surveillance de santé publique dans les zones récréatives d'eau douce. [ABSTRACT FROM AUTHOR]

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