Granulocyte pro-myeloperoxidase is redundantly processed by proprotein convertase furin and PC7 in HL-60 cells.

Neutrophil myeloperoxidase/H2O2/chloride system is a key mechanism to control pathogen infection. This enzyme, myeloperoxidase, plays a pivotal role in the arsenal of azurophilic granules that are released through degranulation upon neutrophil activation, which trigger local hypochlorous acid production. Myeloperoxidase gene encodes a protein precursor named promyeloperoxidase that arbors a propeptide that gets cleaved later during secretory routing in post-endoplasmic reticulum compartments. Although evidence suggested that this processing event was performed by one or different enzymes from the proprotein convertases family, the identity of this enzyme was never investigated. In this work, the naturally producing myeloperoxidase promyelocytic cell line HL-60 was used to investigate promyeloperoxidase cleavage during granulocytic differentiation in response to proprotein convertase inhibitors decanoyl-RVKR-chloromethylketone and hexa-d-arginine. Stable PC knockdown of endogenously expressed proprotein convertases, furin and PC7, was achieved using lentiviral delivery of shRNAs. None of the knockdown cell line could reproduce the effect of the pan-proprotein convertases inhibitor decanoyl-RVKR-chloromethylketone that accumulated intracellular promyeloperoxidase stores in HL-60 cells, therefore illustrating that both furin and PC7 redundantly process this proprotein. [ABSTRACT FROM AUTHOR]

Le système myéloperoxidase/H2O2/chlorure employé par les neutrophiles est un mécanisme clé dans le contrôle des infections par les pathogènes. Cette enzyme, la myéloperoxidase, joue un rôle important dans l'arsenal compris dans les granules azurophiliques qui sont relâchées par la dégranulation des neutrophiles une fois activés. Cette enzyme est responsable de la génération locale d'acide hypochloreux. Le gène encodant la myéloperoxidase génère un précurseur protéique appelé pro-myéloperoxidase qui exhibe un propeptide devant être clivé dans les voies de sécrétions dans un compartiment au-delà du réticulum endoplasmique. Bien que des expérimentations aient déjà mis en lumière que cette étape de maturation soit associée à une ou des enzymes de la famille des proprotéines convertases, l'identité de l'enzyme en étant responsable n'a jamais été démontrée. Ici, en utilisant la lignée promyélocytaire HL-60 qui exprime naturellement la myéloperoxidase, le clivage de la promyélopeoxidase a été étudié durant la différentiation en granulocytes en réponse à des inhibiteurs des proprotéines convertases tel que le décanoyl-RVKR-chloromethylcétone et le peptide hexa-d-arginine. Des répressions géniques stables réalisées au moyen des shRNAs délivrés par transduction lentivirale ont été réalisées contre les deux proprotéines convertases exprimées dans ces cellules, soient furine et PC7. Aucune des répressions n'a reproduit l'accumulation de précurseur promyéloperoxidase dans les cellules comme l'inhibiteur pan-PC décanoyl-RVKR-chloromethylcétone pouvait le faire, démontrant que la furine et PC7 sont capables de cliver de façon redondante cette proprotéine. [Ceci est une traduction fournie par l'auteur du résumé en anglais.] [ABSTRACT FROM AUTHOR]

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